یک مرور کلی آموزشی
- نمونهبرداری مایع آمنیوتیک (آمنیوسنتز)
آنالیز سیتوژنتیک قبل از تولد با جمعآوری نمونههای مایع آمنیوتیک آغاز میشود، روشی که معمولاً بین هفتههای 15 تا 20 بارداری انجام میشود. تحت هدایت سونوگرافی، یک سوزن استریل با دقت وارد حفره آمنیوتیک میشود تا حجم کافی از مایع آسپیره شود. این مرحله باید تحت شرایط کاملاً استریل انجام شود تا خطر برای مادر و جنین به حداقل برسد. - انتقال نمونه و پردازش اولیه
پس از جمعآوری، نمونهها به سرعت به آزمایشگاه سیتوژنتیک منتقل میشوند تا زیستایی سلولها حفظ شود. به محض رسیدن، مایع آمنیوتیک به صورت ماکروسکوپی بررسی شده و سپس به آرامی سانتریفیوژ میشود تا سلولهای جنینی از مایع رویی جدا شوند. نیروی بیش از حد در این مرحله ممکن است یکپارچگی سلولی را به خطر بیندازد و میزان موفقیت کشت را کاهش دهد. - ایجاد کشت سلولی مایع آمنیوتیک
ایجاد کشتهای سلولی مایع آمنیوتیک یکی از حیاتیترین مراحل گردش کار است. سلولهای جدا شده در محیطهای کشت اختصاصی حاوی فاکتورهای رشد، دوباره به حالت تعلیق در میآیند و سپس تحت شرایط کنترلشده دما، رطوبت و CO₂ انکوبه میشوند. در طول روزهای اولیه، به سلولها اجازه داده میشود تا به تدریج به هم بچسبند و وارد تکثیر فعال شوند.
۴. نظارت بر رشد و حساسیت کشت
کشتهای مایع آمنیوتیک به نوسانات محیطی، بهویژه بیثباتی دما و تغییر pH، بسیار حساس هستند. بنابراین، نظارت مداوم بر پارامترهای انکوباسیون در طول دوره کشت ضروری است. هرگونه انحراف از شرایط بهینه ممکن است فعالیت میتوزی را به تأخیر بیندازد یا منجر به شکست کشت شود و نمونهبرداری مکرر را ضروری سازد.
۵. برداشت و آمادهسازی کروموزوم
پس از دستیابی به تکثیر سلولی کافی، کشتها با مهارکنندههای میتوزی تیمار میشوند تا سلولها در متافاز متوقف شوند. سپس سلولها برداشت میشوند، به صورت هیپوتونیک تیمار میشوند و برای تهیه گسترشهای کروموزومی با کیفیت بالا تثبیت میشوند. این آمادهسازیها متعاقباً برای رنگآمیزی روی اسلایدهای میکروسکوپی قرار میگیرند.
۶. رنگآمیزی و آنالیز کاریوتایپ
آمادهسازی کروموزومها معمولاً با استفاده از تکنیکهای G-banding رنگآمیزی میشوند که امکان تجسم الگوهای باندینگ مشخص را فراهم میکند. متافازهای رنگآمیزی شده به صورت میکروسکوپی بررسی میشوند و کروموزومها طبق دستورالعملهای بینالمللی استاندارد برای تولید کاریوتایپ شناسایی، شمارش و مرتب میشوند.
۷. تفسیر و گزارش نتایج
مرحله نهایی شامل تفسیر یافتههای سیتوژنتیک و تهیه یک گزارش آزمایشگاهی جامع است. ناهنجاریهای تشخیص داده شده، مانند تغییرات عددی یا ساختاری کروموزومی، با استفاده از نامگذاری استاندارد سیتوژنتیک توصیف میشوند. سپس گزارش قبل از ارائه به پزشک ارجاع دهنده، بررسی و اعتبارسنجی میشود.